對(duì)饑餓處理的操作性定義是在正常飼養(yǎng)條件下對(duì)小鼠在一定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行食物剝奪（不包括水）。在結(jié)束行為實(shí)驗(yàn)后，恢復(fù)食物供給。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：以C57 8周齡成年雄性小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。以5只同性同齡同批次小鼠分為一籠群居飼養(yǎng)，配備符合SPF級(jí)條件的籠具墊料，飼料，飲用水，三天檢疫期內(nèi)無(wú)異常轉(zhuǎn)移至飼養(yǎng)間飼養(yǎng)，晝夜節(jié)律為12小時(shí)開(kāi)燈12小時(shí)關(guān)燈。在飼養(yǎng)間飼養(yǎng)適應(yīng)一周后開(kāi)始正式實(shí)驗(yàn)，減少小鼠在運(yùn)輸過(guò)程中產(chǎn)生的應(yīng)激對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程

實(shí)驗(yàn)分為三組，①正常進(jìn)食組，②食物剝奪24ｈ組，③食物剝奪48ｈ組。（1）行為實(shí)驗(yàn)前期，正常進(jìn)食組與食物剝奪24ｈ組在行為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前24小時(shí)，食物剝奪48ｈ組在行為實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前48小時(shí)，分別進(jìn)行體重秤量記錄。秤量結(jié)束后，②③組分別拿走食槽內(nèi)的飼料，并檢查鼠籠內(nèi)無(wú)食物掉落。①組不拿走食物，操作完成后三組小鼠放回籠架上，等待正式行為實(shí)驗(yàn)。（2）行為實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始前，將不同組進(jìn)行不同處理的小鼠進(jìn)行第二次稱重并記錄。（3）行為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將不同組進(jìn)行不同處理的小鼠進(jìn)行第三次稱重并記錄，并給行為結(jié)束后的小鼠恢復(fù)食物。（4）恢復(fù)進(jìn)食30分鐘后，將不同組進(jìn)行不同處理的小鼠進(jìn)行第四次稱重并記錄。

Fig1 饑餓量化處理流程圖

饑餓處理后本能防御性行為測(cè)試

選取的本能防御性行為行為范式包括凍結(jié)行為（freeze）和逃跑行為（flight）。當(dāng)小鼠在自由活動(dòng)時(shí)，當(dāng)來(lái)自上視野出現(xiàn)以一定速度擴(kuò)大的陰影刺激時(shí)，能夠誘發(fā)小鼠出現(xiàn)這兩類防御性行為。

行為學(xué)裝置：行為學(xué)裝置包括四部分，箱體上方視覺(jué)刺激屏，紅外檢測(cè)運(yùn)動(dòng)軌跡裝置，小鼠活動(dòng)區(qū)域，信號(hào)處理工作站。視覺(jué)刺激屏與紅外檢測(cè)裝置同時(shí)與信號(hào)工作站連接，紅外檢測(cè)裝置通過(guò)紅外射線發(fā)放自動(dòng)檢測(cè)小鼠位置信息，將紅外信號(hào)處理可視化通過(guò)程序依據(jù)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)軌跡控制視覺(jué)刺激的自動(dòng)發(fā)放。小鼠活動(dòng)區(qū)域，整個(gè)裝置分為安全區(qū)、覓食活動(dòng)區(qū)兩個(gè)部分。為了避免小鼠逃到角落里，將覓食區(qū)域設(shè)計(jì)成圓形，使逃避樣行為的小鼠都回到安全區(qū)。

Fig2 行為學(xué)裝置示意圖

1、flight范式

在flight范式中分為覓食區(qū)域和安全區(qū)域，小鼠在環(huán)境中適應(yīng)一段時(shí)間后會(huì)對(duì)狹小黑暗無(wú)明確危險(xiǎn)來(lái)源的區(qū)域當(dāng)作是安全區(qū)，同時(shí)也會(huì)對(duì)環(huán)境中寬敞的區(qū)域進(jìn)行探索，當(dāng)小鼠進(jìn)入覓食區(qū)域的中間觸發(fā)進(jìn)行探索，將會(huì)觸發(fā)頭頂正上方來(lái)自視野上方的擴(kuò)大黑色陰影圓盤的視覺(jué)刺激，此時(shí)小鼠將觸發(fā)快速逃跑回安全區(qū)的行為。

2、freeze范式

在freeze范式中與flight范式相比減少了安全區(qū)域，也就是當(dāng)小鼠進(jìn)入這個(gè)環(huán)境之后沒(méi)有一個(gè)相對(duì)安全的躲避區(qū)。當(dāng)小鼠在圓形的覓食區(qū)域自由探索適應(yīng)后，同樣是進(jìn)入中間區(qū)域后將會(huì)觸發(fā)頭頂正上方來(lái)自視野上方的擴(kuò)大黑色陰影圓盤的視覺(jué)刺激，在沒(méi)有安全區(qū)躲避的條件下，此時(shí)小鼠將會(huì)出現(xiàn)凍結(jié)樣防御性行為，表現(xiàn)為身體持續(xù)性僵直，數(shù)秒鐘后恢復(fù)運(yùn)動(dòng)。

晝夜節(jié)律影響本能防御性行為

饑餓作為一種機(jī)體的生理變化，受到晝夜節(jié)律變化的影響。小鼠以晝夜節(jié)律為12小時(shí)開(kāi)燈12小時(shí)關(guān)燈飼養(yǎng)，而根據(jù)小鼠活動(dòng)的習(xí)性作者發(fā)現(xiàn)小鼠晝伏夜出，白天主要是他們進(jìn)入睡眠的時(shí)間段，而晚上開(kāi)始活動(dòng)量增大。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行饑餓處理是從下午兩點(diǎn)之后拿走食物并且進(jìn)行行為測(cè)試。為了探究是否存在晝夜節(jié)律的變化也對(duì)小鼠本能防御行為產(chǎn)生影響，因此作者又做了另一個(gè)實(shí)驗(yàn)在晚上熄燈之后進(jìn)行饑餓處理與行為測(cè)試。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程：在每天下午7點(diǎn)進(jìn)行饑餓處理食物剝奪，進(jìn)行不同饑餓處理的三組小鼠在第三天進(jìn)行行為測(cè)試，行為測(cè)試同樣也是在下午7點(diǎn)以后。

食物剝奪饑餓處理后的量化評(píng)估

實(shí)驗(yàn)分為三組，正常進(jìn)食組（Ctrl），食物剝奪一天組（FDld），食物剝奪2天組（FD2d），進(jìn)行饑餓處理一天后小鼠的體重下降到原有的89％，而饑餓兩天組下降到原始體重的百分之85％，并且對(duì)照組與饑餓處理組之間都存在著顯著性差異，因此剝奪食物對(duì)小鼠的體重有十分顯著的改變。經(jīng)過(guò)三組小鼠在行為測(cè)試結(jié)束后恢復(fù)食物的供給，測(cè)試在半個(gè)小時(shí)內(nèi)的每組小鼠的進(jìn)食量，饑餓處理的小鼠進(jìn)食量達(dá)到0.2g以上，與對(duì)照組存在顯著性差異，饑餓一天和饑餓兩天的進(jìn)食量雖然沒(méi)有差異但從趨勢(shì)來(lái)看，饑餓程度越高的小鼠進(jìn)食量越大。因此二十四小時(shí)的食物剝奪能夠有效的達(dá)到饑餓狀態(tài)。

Fig2 饑餓處理的量化評(píng)估

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